高效液相色谱仪测定桔梗中的桔梗皂苷D含量

高效液相色谱仪测定

桔梗中的桔梗皂苷D含量

2018年4月

版权所有 © sainaer Corporation

保留所有权利

1摘要

     本文根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片桔梗中桔梗皂苷D含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，桔梗皂苷D保留时间RSD%在0.35%，峰面积RSD%为1.61%。

关键词：中药饮片 桔梗 桔梗皂苷D  E800蒸发光散射检测器 高效液相色谱 HPLC

 桔梗皂苷D是一种从桔梗上提取出来的皂苷中的一种。桔梗皂苷D主要有祛痰、镇咳、镇静、镇痛、解热、抗炎、保肝、降脂、抗肥胖等多种药理作用。

 有研究结果显示，桔梗根中含有近40种皂苷类成分。何美莲等依据皂苷元母核化学结构的变化规律将桔梗的皂苷类成分归纳为桔梗酸(platycodic acid)类、桔梗二酸(platcogenic acid)类和远志酸(polygalacic acid)类3种主要类型，桔梗皂苷D为桔梗酸类的一种。

2检测部分

2.1仪器

本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器;sainaer色谱工作站。

2.2  分析条件

色谱柱：SAINAER  C18 4.6*250mm 5um

流动相：乙腈：水=25：75（V/V）

流速：1ml/min

柱温：35℃

气体流量：2.8L/min

蒸发温度：100℃

进样量：10μL

等度洗脱

2.3  标准品溶液的配制和样品处理

标准品品溶液的制备  取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

样品溶液的制备  取桔梗粉末（过二号筛）约2g，精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱[100～120目，10g，内径为2cm，用三氯甲烧-甲醇（9：1）混合溶液湿法装柱]上，以三氯甲烷-甲醇（9:1）混合溶液50ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇-水（60:20：3）混合溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，继用三氯甲烷-甲醇-水（60:29:6）混合溶液100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即制得桔梗样品溶液。

3结果

 3.1   赛那尔色谱工作站中对照品的色谱图

3.2   线性关系

将配制浓度为0.5mg/ml的标准溶液，分别精密吸取对照品溶液2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，供试品溶液，注入H6000高效液相色谱仪，测定，以峰面积对数为纵坐标，已进样量对数为横坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1。

3.3   精密度试验

50mg/ml的桔梗皂苷D标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示：

3.4   样品测试

使用2.3配制好的桔梗样品溶液得出图4图谱：

4结论

经测试，本方法的工作曲线好，R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD%=0.35%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.61%（n=6），小于国家要求3.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测桔梗中桔梗皂苷D的含量。

5客户现场照片