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高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2018-04-20 13:15:35


高效液相色谱仪测定

黄芪中的黄芪甲苷含量

 


 


                                         20183

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  

  

 

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1摘要


    本文根据《中国药典》2015版要求,测定中药饮片黄芪中黄芪甲苷苷含量的高效液相色谱方法,按中国药典条件,使用赛那尔E800蒸发光散射检测器,适当调整柱温,黄芪甲苷保留时间RSD%0.38%,峰面积RSD%1.75%

关键词:中药饮片 黄芪 黄芪甲苷 E800蒸发光散射检测器  高效液相色谱 HPLC

      黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物,有“超级黄芪多糖”之称。黄芪甲苷能增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。

    黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用,还有些是黄芪多糖无法比拟的作用,其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多,抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少,效果好,更是有“超级黄芪多糖”之称。


 

1 黄芪甲苷结构式


2检测部分

 

2.1仪器


本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器;sainaer色谱工作站。


2.2  分析条件


色谱柱:SAINAER C18 4.6*250mm 5um

流动相:乙腈:水=32:68V/V

流速:1ml/min

柱温:35

气体流量:2.8L/min

蒸发温度:75

进样量:10μL

等度洗脱


 

2.3  标准品溶液的配制和样品处理


标准品品溶液的制备  取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,即得。

样品溶液的制备  取干燥的黄芪切片,粉碎后,取中粉约4g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4小时,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5ml使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为12cm),以水50ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30ml洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即制得黄芪样品溶液。

 

3结果

 

3.1   标样的色谱图



                        图2 0.5mg/ml黄芪甲苷标准品色谱图


 

3.2   线性关系


将配制浓度为0.5mg/ml的标准溶液,分别精密吸取对照品溶液2μL5μL10μL15μL20μL注入液相色谱仪,测定,以峰面积对数为横坐标,已进样量对数为纵坐标绘制工作曲线,所得曲线良好,R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1

  



3.3   精密度试验


0.5mg/ml的黄芪甲苷标准品连续测定6次,考察方法的精密度,保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示:


    


 

3.4   样品测试


使用2.3配制好的黄芪甲苷样品溶液得出图4图谱:


  

                                   

                                    图4 黄芪样品图谱


  


4结论


经测试,本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好,保留时间RSD%=0.38%n=6),小于国家要求0.5%以内,峰面积RSD%=1.75%n=6),小于国家要求3.0%以内。并且峰形完好,拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测黄芪中黄芪甲苷的含量。




5客户现场照片