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高效液相色谱分析方法有哪些

* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2022-04-04 10:34:03
高效液相色谱法(HPLC),以前称为高压液相色谱法,是一种分析化学技术,用于分离,鉴定和定量混合物中的每种成分。高效液相色谱法是一种用于化学化合物分析技术,包括生物聚合物,小分子和聚合物。在这种方法中,首先将样品溶解以制成溶液。然后将此溶液注入包含与样品相互作用的树脂的“色谱柱”中。这将减慢样品通过“柱”的移动,并且当样品从色谱柱的另一侧出来时,将对其进行检测。这样,您既可以知道样品出来的时间,也可以知道检测到的样品的强度。

一、高效液相色谱如何工作
1.少量的待分离和测试的样品混合物通过色谱柱送入流动相中。可以使用不同类型的色谱柱,其中包含不同粒径和表面的吸附剂。

2.混合物以不同的速度通过色谱柱,并与吸附剂(也称为固定相)相互作用。混合物中每种组分的速度取决于1)其化学性质,2)色谱柱的性质和3)流动相的组成。特定分析物从色谱柱中出来的时间称为其保留时间。保留时间是在特定条件下测量的,并被视为给定分析物的鉴定特征。

3.吸附剂颗粒本质上可能是疏水的或极性的。常用的流动相包括水和有机溶剂(如乙腈和甲醇)的任何混溶组合。也可以使用无水流动相。

4.流动相的水性成分可能包含酸,例如甲酸,磷酸或三氟乙酸或盐,以实现样品成分的分离。流动相的组成在色谱分析过程中保持恒定或变化。恒定方法对于分离对固定相的亲和力不太相似的样品成分非常有效。在变化的方法中,流动相的组成从低到高洗脱强度都不同。流动相的洗脱强度通过分析物的保留时间来反映,其中高洗脱强度会产生快速洗脱。


二、高效液相色谱注意事项
要清洁系统并使其平衡,您需要运行足够的溶剂。但是,此数量在列之间有所不同。按照上述步骤操作时,典型的4.6 mm x 30 cm色谱柱应保持清洁。
等度意味着溶剂浓度在整个运行过程中保持恒定。
在样品之前和样品之前运行标准品很有用。使用标准品可以轻松确定哪个峰与您感兴趣的分子有关。
始终使用HPLC级溶剂。对于经常与抑制剂一起出售的溶剂尤其如此,这也使您检测目标分子的能力复杂化。


HPLC分配过程与液-液萃取过程非常相似,不同之处在于前者是连续过程,而后者是逐步过程。建议进行试验分配过程,以确定可以提供足够分离度的准确HPLC方法。
二、高效液相色谱注意事项
要清洁系统并使其平衡,您需要运行足够的溶剂。但是,此数量在列之间有所不同。按照上述步骤操作时,典型的4.6 mm x 30 cm色谱柱应保持清洁。
等度意味着溶剂浓度在整个运行过程中保持恒定。
在样品之前和样品之前运行标准品很有用。使用标准品可以轻松确定哪个峰与您感兴趣的分子有关。
始终使用HPLC级溶剂。对于经常与抑制剂一起出售的溶剂尤其如此,这也使您检测目标分子的能力复杂化。


HPLC分配过程与液-液萃取过程非常相似,不同之处在于前者是连续过程,而后者是逐步过程。建议进行试验分配过程,以确定可以提供足够分离度的准确HPLC方法。


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