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液相色谱仪常见故障及应对措施

* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2021-05-24 10:50:00
液相色谱仪(HPLC)是应用液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。HPLC广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。
  液相色谱是应用多的色谱分析方法,液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。
  使用液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中。液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
  液相色谱仪常见故障及应对措施:
  1、柱压高
  原因:缓冲液盐分沉积于柱内;或者是样品污染沉积。
  措施:如果是缓冲液盐分沉积于柱内,则用40~50℃的纯水低速正向冲洗柱子,逐渐提高流速冲洗,柱压大幅度下降后再用常温纯水清洗,*后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。
  如果是样品污染沉积导致,则用纯水反向冲洗柱子,再用甲醇冲洗,随后用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子,再用甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,*后用甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟。
  2、气泡溢出
  原因:主要是由于过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,内部霉菌繁殖形成菌团阻塞了过滤器导致。
  措施:将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,利用超声清洗既分钟。或者将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,再用纯水清洗,打开purge键清洗脱气,直到没有气泡冒出。打开泄压阀,打开泵,纯水冲洗过滤器1小时左右。
  3、无压力指示,也无液体流过
  原因:泵密封垫圈磨损;或大量气泡进入泵体。
  措施:更换密封垫圈,或用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
  4、压力波动大,流量不稳定
  原因:系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物。
  措施:观察流动相的量,动相要充分脱气。如果是单向阀和阀座不能密封,则拆下单向阀,放入盛有******的烧杯用超声波清洗。
  5、峰面积重复性不佳
  原因:进样阀漏液;或加样针不到位,或者是液量不足。
  6、出峰不佳,峰分叉
  原因:色谱柱被污染,或者柱头填料塌陷。
  措施:色谱柱被污染则需清洗色谱柱。如果柱头填料塌陷或硬结,则去除硬结部分,冲新装入新填料。反复滴甲醇,压紧不锈钢杆,直至填满。柱头用甲醇冲洗干净。