高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定心舒康片中黄芪甲苷的含量
* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2019-06-12 8:43:27
摘要】 目的：建立高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定心舒康片中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：高效液相色谱－蒸发光散射粒测法。结果与结论：黄芪甲苷在0.46-9.16μg范围内呈线性关系。平均回收率为97.36%，RSD为1.2%(n=6)。【关键词】 高效液相色谱－蒸发光散射检测法；舒康片/化学合成；黄芪甲苷/标准
心舒康片系由黄芪、丹参、延胡索等5味中药经提取制成的复方制剂。具有益气活血，化瘀止痛之功效。方中黄芪为君药，其主要有效成分为黄芪甲苷。笔者采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定其黄芪甲苷的含量，报道如下。
1 仪器与试药
LC�10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司)；ELSD�2000蒸发光检测器(美国Alltech)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为110781�200311，为含量测定用)；乙腈为色谱纯，水为经Milli�Q过0.22μm膜净化的超纯水，其它试剂均为分析纯。心舒康片样品(厂家提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent HC�C18(4.6×250mm，5μm)，流动相为乙腈－水(32：68)，流速为1.0mL/min-1，柱温35℃，进样量：对照品为5μl 、10μl，供试品为20μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg黄芪甲苷的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取重量差异项下的供试品，研细，取1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60ml，加热回流至提取液无色。提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.458mg的溶液，分别精密吸取1、5、10、15、20μl注入液相色谱仪，测定，以对照品的进样量的对数值为横坐标，色谱峰峰面积的对数值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝1.55177X+9.7179(r=0.99996)。黄芪甲苷在0.46-9.16μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.458mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定其峰面积值，黄芪甲苷的RSD为0.46％。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔一定时间测定一次，结果黄芪甲苷溶液的含量在12h内基本稳定。
2.7 重复性试验 取同一供试品，独立测定6次，黄芪的RSD为0.9％。结果表明，本法重复性良好。
2.8 回收率试验 精密称取同法测定已知含量的供试品(批号：0703326)6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.4ml(浓度为0.458mg/ml)，依法测定，计算回收率。结果黄芪甲苷平均回收率为97.36%，RSD为1.2%。
2.9 样品的含量测定 依同样方法测定样品3批，结果见表1。
表1 样品测定结果批号含量(mg/片)平均值(mg/片)07033250.630.620.6307033260.610.610.6107033280.610.630.623 讨论
3.1 相同时间下的不同提取方式选择 采用索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱、索氏提取经D101型大孔吸附树脂柱及超声提取３种方法，结果以索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱的方法测得的黄芪甲苷含量最高。
3.2 提取方法的时间选择 在索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱的方法下，对提取时间进行考察，将(1)提取液至无色与(2)提取4h、(3)提取3h进行比较，结果以提取液至无色的提取方法测得的黄芪甲苷含量最高
心舒康片系由黄芪、丹参、延胡索等5味中药经提取制成的复方制剂。具有益气活血，化瘀止痛之功效。方中黄芪为君药，其主要有效成分为黄芪甲苷。笔者采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定其黄芪甲苷的含量，报道如下。
1 仪器与试药
LC�10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司)；ELSD�2000蒸发光检测器(美国Alltech)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为110781�200311，为含量测定用)；乙腈为色谱纯，水为经Milli�Q过0.22μm膜净化的超纯水，其它试剂均为分析纯。心舒康片样品(厂家提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent HC�C18(4.6×250mm，5μm)，流动相为乙腈－水(32：68)，流速为1.0mL/min-1，柱温35℃，进样量：对照品为5μl 、10μl，供试品为20μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg黄芪甲苷的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取重量差异项下的供试品，研细，取1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60ml，加热回流至提取液无色。提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.458mg的溶液，分别精密吸取1、5、10、15、20μl注入液相色谱仪，测定，以对照品的进样量的对数值为横坐标，色谱峰峰面积的对数值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝1.55177X+9.7179(r=0.99996)。黄芪甲苷在0.46-9.16μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.458mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定其峰面积值，黄芪甲苷的RSD为0.46％。
2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔一定时间测定一次，结果黄芪甲苷溶液的含量在12h内基本稳定。
2.7 重复性试验 取同一供试品，独立测定6次，黄芪的RSD为0.9％。结果表明，本法重复性良好。
2.8 回收率试验 精密称取同法测定已知含量的供试品(批号：0703326)6份，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.4ml(浓度为0.458mg/ml)，依法测定，计算回收率。结果黄芪甲苷平均回收率为97.36%，RSD为1.2%。
2.9 样品的含量测定 依同样方法测定样品3批，结果见表1。
表1 样品测定结果批号含量(mg/片)平均值(mg/片)07033250.630.620.6307033260.610.610.6107033280.610.630.623 讨论
3.1 相同时间下的不同提取方式选择 采用索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱、索氏提取经D101型大孔吸附树脂柱及超声提取３种方法，结果以索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱的方法测得的黄芪甲苷含量最高。
3.2 提取方法的时间选择 在索氏提取不经D101型大孔吸附树脂柱的方法下，对提取时间进行考察，将(1)提取液至无色与(2)提取4h、(3)提取3h进行比较，结果以提取液至无色的提取方法测得的黄芪甲苷含量最高
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