高效液相色谱法测定那如一5水丸胡椒碱含量

　　1、仪器、试剂及药品

　　1.1高效液相色谱仪：1100型(美国Agilentg公司制造)；十万分之光电天平：TG332A型(湘仪制造)；超声清洗仪： AS2060B型(上海科学仪器公司制造)。

　　1.2色谱条件：色谱柱C8(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水(77：23)；流速：lmL・min-1；柱温30°C。

  　  试药：甲醇：色谱纯由美国Tedai公司生产；胡椒碱由中国药品生物制品检定所提供；那如一5水丸，由内蒙古自治区国家蒙药制剂中心生产。

　　2、方法与结果

　　2.1线性范围：精密称取干燥的胡椒碱对照品4.6mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，分别精密吸取1、2、3、4、5mL-1溶液置10mL量瓶中，加甲醇至刻度。浓度分别为9.2、18.4、27.6、36.8、46.0μg・mL，取10μL按色谱法条件测定。回归方程：Y=30510X一14255，r=0.999。

　　2.2供试品溶液制备：取那如一5水丸研成细粉，各取50mg加到50ml锥形瓶中，分别精密加入无水乙醇50ml，称重，超声提取30min，再称重，补足提取过程中损失量。用注射器过滤头过滤(O.45μm)，即得供试品溶液(在棕色瓶内保存)。

　　2.3精密度试验：取胡椒碱对照品溶液，按上述色谱条件测定，连续进样5次，结果为RSD=0.53％，复合测定要求。

　　2.4稳定性试验：取那如一5水丸供试品溶液，分别于O、2、8h进样，测定。测定结果表明，供试品溶液在8h内稳定。

　　2.5回收率试验：取已知胡椒碱含量的那如一5水丸样品25mg，分别精密加入胡椒碱对照品，按供试品制备方法提取，过滤。按色谱条件测定。计算5次测定平均回收率，结果见表1。

 　　　　　表1 　 那如一5水丸加样回收率测定 

 NO   样品含   胡椒碱    加入量    理论值    测得值    回收率   平均回收  RSD

 1    25.O      0.25      0.21      0.46      0.45      97.8

 2    25.O      0.25      0.23      0.48      0.47      97.9

 3    25.0      0.25      0.23      0.48      0.48      100       98.3    1.O

 4    25.O      0.25      0.22      0.47      0.46      97.8

 　　2.6供试品含量测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液1叫，依上述色谱条件测定，计算那如一5水丸中胡椒碱含量，结果见表2。   

    表2  不同批次那如一5水丸胡椒碱含量测定

    样品           胡椒碱含量(mg％)       (μg/粒)         x(_)

  070230             0.51                  0.51

  070512             0.50                  0.50

　　　3、结论

    研究测定表明，那如一5水丸阴性样品胡椒碱色谱位置无干扰，样品胡椒碱分离效果好，样品胡椒碱平均含量为0.52μg／粒(0.1g)。采用本法测定那如一5水丸中胡椒碱的含量，操作简便，准确可靠，可用于制定该产品的质量控制标准。