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激光光散射检测高速反流色谱

* 来源 : 无锡赛那尔 * 作者 : sainaer * 发表时间 : 2019-02-20

      高速反流色谱法(HSCCC)是一项强有力的分离技术,并逐渐应用于天然产物化学。分析型HSCCC的仪器已经可以得到,并有在天然产物化学方面应用的综述。若干种类型的检测器已经被连接到分析型HSCCC仪器上,其中包括UV、IR和质谱(MS)等检测器。这些系统能提供关于溶质结构的重要信息。然而它们对于HSCCC的应用受限于仪器使用的复杂性(MS),高噪音水平(UV)或灵敏度(IR)。
  光散射作为液相色谱法的一种选择检测原理已被提出。蒸发激光光散射检测法(ELSD)作为一种通用检测方法,是基于以下原理:洗脱液[例如来自一个高效液相色谱(HPLC)柱]被雾化和蒸发,从而在载气流中留下溶质的微小粒子。这些粒子通过一激光束,使光发生散射,散射的光被检测。其响应的大小与通过检测器的溶质质量有关。已经证实,使用HPLC分析碳水化合物和类脂时,ELSD会特别有用。
  在这篇文章中,我们报道了ELSD系统和分析型HSCCC的连接。

1 实验

  溶媒HPLC级(Burdick & Jackson)。水通过Milli-Q系统(Millipore)净化。参比物从C.Roth Inc.(Karlsruhe,F.R.G.)购买。“微量”高速反流色谱仪与一个30 mL螺旋管和0.85 mm I.D.聚四氟乙烯管从P.C.Inc.(Potomac,MD,U.S.A.)获得;溶媒利用Milton Roy实验室的泵泵取;ELSD系统从Varex(Burtonsville,MD,U.S.A.)获得;色谱图被记录在Varian 9176型图记录仪上(满标1 mV)。

  首先用固定相充满HSCCC螺旋管,然后开始旋转,这时固定相被持续泵入。当转速达到1800 r.min-1时,流动相通过入口被引入。当螺旋管达到平衡以后(即流出物由固定相改为流动相时),将流速调为0.8 mL.min-1。然后,将螺旋管出口与光散射检测器相连接。当基线变得平滑时指示溶媒已被完全蒸发。将化合物1~4(见图1)溶解在固定相里。样品溶液通过Valco公司的六通阀和0.25 mL样品环注入(图1,0 min)。注入的量为300 μg(1),10 μg(2),35 μg(3)和20 μg(4)。反压低于1378.95 kPa,运行后固定相保留90%。检测器预热20 min;时间恒量为1 s。将检测器的随意流动设为8,形成一个反压为220.6 kPa的氮载气流。

分析型HSCCC―ELSD分离7-甲氧基香豆素(1)、橙皮素(2)、莨菪亭(3)、微形酮(4)

条件:多层螺旋管,行星离心机(30 mL;0.85 mm I.D.);溶媒:氯
仿―甲醇―水(13∶7∶8)下层为流动相,流速为0.8 mL.min-1

2 结果和讨论

  图1显示了由分析型HSCCC完成的标准化合物1~4的混合物的分离。这种分离由溶媒系统氯仿―甲醇―水(13∶7∶8)下层作为流动相完成。流速为0.8 mL.min-1。螺旋管流出物被直接引入ELSD系统的喷雾室内。喷雾室和排气管的温度被分别设定为110 ℃和80 ℃。设定相对高的温度是为了蒸发流动相中的少量水份,并使非保留固定相(含水的)尽可能微滴化。含水固定相遗留下来不会影响色谱。对于2~4化合物(熔点超过200 ℃)每种化合物每次注射10~35 μg时,可以得到很好的检测响应。而化合物1即使每次注射大于100 μg,也仅可给出相对微弱的检测信号。对此可能的解释为:熔点为117 ℃的7-甲氧基香豆素(1)以液状微滴通过检测器光束,由此导致激光光线不能有效地散射。当同一样品混合物被分离时,其信噪比优于光电二极管检测器。图1色谱图显示了一条平滑基线,而峰洗脱时可观察到较强和无法解释的检测器噪音。

  ELSD是一种灵敏而非专一性的质量检测方法,其检测限大于毫微克数量级。然而,如果物质的熔点等于或小于喷雾室温度,则可能难以检测。正如这里应用的例子。这一点对于一个复杂的样品,象分析植物提取物时则必须考虑。由于ELSD是一个非破坏技术,为了在制备型HSCCC使用这个检测方法,可以在洗脱线上装置一个流量分离管。由于固定相的残留而引起检测噪音,典型的象UV检测器,则被完全消除了。我们的初步结果显示,对分析型HSCCC来说,ELSD是一种理想的、易使用的检测手段。进一步对于无紫外线吸收化合物和高紫外切断的溶媒的评价,目前正在我们实验室进行中。