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高效液相色谱仪梯度洗脱曲线

* 来源 : 无锡赛那尔 * 作者 : sainaer * 发表时间 : 2019-01-16
    高效液相色谱仪梯度洗脱时,常用一个弱极性溶剂A和一个强极性溶剂B组合,以梯度洗脱时间为横坐标,以流动相中强极性组分B的体积百分含量为纵坐标,可绘出梯度洗脱曲线。若在单位时间内,强极性溶剂B在流动相中的体积百分含量以恒定速率增加,则流动相的极性呈线性梯度输出;若不以恒定速度增加,则流动相的极性呈凸形或凹形梯度输出。

当梯度洗脱方式确定后,对应不同的梯度洗脱形状获得色谱图。

1、若呈线性梯度洗脱,色谱图中每个谱带宽度相等,各个谱带间具有相同的分离度。

2、若呈指数凸形梯度洗脱,在分离开始时,B的体积百分含量增加迅速,使各组分谱带以较低的平均容量因子k值洗脱,最终谱带的k值也较低,使开始被洗脱的色谱峰形尖锐,分离度减小。在分离的后期,B的体积百分含量增长减慢,使后被洗脱的色谱峰谱带加宽,分离度增大。

3、若呈指数凹形梯度洗脱,开始被洗脱的色谱峰谱带较宽,分离度较好;后洗脱的色谱峰谱带较尖锐,分离度减小。