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HPLC法测定消渴丸中葛根素的含量

* 来源 : 无锡赛那尔 * 作者 : sainaer * 发表时间 : 2019-01-04

[摘要]目的建立消渴丸中葛根素的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为HypersilBDSC18色谱柱,流动相为甲醇-水(25∶75),流速为1.0ml/min,检测波长为250nm。结果进样量在0.0941~0.4705ug范围内线性关系良好(r=0.9997.n=5),平均回收率为101.0%,RSD为0.59%(n=5)。结论该方法操作简单,精密度高,重现性好,可作为控制消渴丸质量的方法。

  [关键词]葛根素;含量测定;HPLC;消渴丸

  消渴丸是由葛根、地黄、黄芪、天花粉、玉米须、五味子、山药、格列本脲等七味中药和一味西药加工而成的中西药结合制剂,具有滋肾养阴,益气生津之功效。临床上主要用于治疗2型糖尿病。原标准中只有葛根素的薄层鉴别,没有含量测定。葛根是方中君药,葛根素为葛根的主要成分。为了有效控制制剂的质量,本实验参考文献[1-2],采用高效液相色谱法测定消渴丸中葛根素的含量,方法简便,精密度高,结果准确可靠。

  1.仪器与试药

  高效液相色谱议:Waters高效液相色谱系统,1525泵,2996紫外检测器(美国),Empower工作站;葛根素对照品(批号:110752-200410,供含量测定用,中国药品生物制品检定所);甲醇(色谱纯),水为重蒸水,消渴丸(自购)。

  2.方法与结果

  2.1对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品适量,加25%甲醇制成50g/ml溶液,即得。

  2.2供试品溶液的制备:取本品10丸,研细,精密称取约0.2g,置100ml具塞锥形瓶中,精密加入25%甲醇50ml,称定重量,加热回流30min,放冷,再称定重量,用25%甲醇补足减失的重量,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45m)滤过,取滤液,即得。

  2.3色谱条件:依利特HypersilBDSC18色谱柱(4.5mm×200mm,5m);流动相:甲醇-水(25∶75);检测波长:250mm,柱温:室温;体积流量:1.0ml/min;理论板数按葛根素峰计算,不低于2000。

  2.4空白试验:取除葛根以外的各原药材,按处方量制备供试品,照2.2项下方法制备空白对照溶液,微孔滤膜(0.45m)滤过,进样,结果表明,本实验条件下,其他成分对葛根素的测定无干扰。见图1。

  2.5线性关系的考察:精密称取葛根素对照品9.41mg,置100ml量瓶中,加25%甲醇溶液使溶解,并加至刻度,摇匀,即得(94.1g/ml)。用25%甲醇依次稀释得到9.41、18.85、28.23、37.64、47.05g/ml的溶液,按上述色谱条件各取10l进样,测定峰面积。以峰面积y为纵坐标,进样量x为横坐标,得回归方程:y=3283x+31522,=0.9997。结果葛根素在0.0941~0.4705g与峰面积呈良好的线性关系。

  2.6精密度试验:精密吸取葛根素对照品溶液10l,在上述色谱条件下重复进样5次,分别测定峰面积积分值,其RSD=1.11%。

  2.7稳定性试验:精密吸取供试品溶液10l,按上述色谱条件,每隔60min进样一次,连续进样5次,在4h内对照品溶液中葛根素峰面积积分值,其RSD=2.37%(n=5),表明溶液在4h内基本稳定。

  2.8重现性试验:取同一批号样品(批号:HF0011)样品,称取5份,依法制备供试品溶液,分析,测得含量值,其RSD=1.04%。

  2.9回收率试验:采用加样回收法。精密称取批号为HF011的样品5份,每份约0.11g(含葛根素1.54mg),分别加入0.256mg/ml葛根素对照品溶液6ml,混匀,制备供试品溶液,按2.2项下方法测定,计算回收率,结果平均回收率为101.0%,RSD=0.59%(n=5)。

  2.10样品含量测定:取不同批号的消渴丸,制备供试品溶液,微孔滤膜(0.45m)滤过,进样测定。

  3.讨论

  3.1选用25%甲醇作溶剂,加热回流30min,可将葛根素提取完全。用甲醇―水(25∶75)作流动相,分离效果较好,且无干扰吸收峰。

  3.2本实验采用HPLC法测定消渴丸中葛根素的含量,提取方法简单,分析快速,精密度高,重现性好,可较好的控制质量。

  3.3样品测定结果表明,各批号间葛根素含量存在一定差异,为有效的控制产品质量,必须严格工艺条件。

  参考文献

  [1]中国药典.2005年版.一部.233-234

  [2]戎欣玉,邵文亮.马燕等.HPLC法测定参葛颗粒中葛根素的含量[J].中草药,2004,35(9):1013-1015.